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#核酸检测# 干货 | 核酸检测中的样本预处理,你get到了吗?

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真空采血管品种多样,如何挑选合适的采血管?
灭活型和非灭活型病毒保存液如何挑选?
面对粘稠的痰液样本,如何才能有效提取核酸?

2019年底新型冠状病毒肺炎在中国肆虐,因其高度传染性,国家对此次疫情极度重视,组织全国力量防控疫情。科研界在短时间内即分离出新型冠状病毒毒株,破解其核酸序列。新冠核酸检测技术开始普及,进入大众视野,开启了病原核酸检测的时代。

图片来源于网络(侵删)
病原核酸检测包括样本采集、核酸提取、核酸扩增。都会对最终结果带来决定性的影响。样本采集的时间和部位,样本的处理和保存,核酸提取的效率以及扩增试剂的灵敏度都会影响最终结果的判读。核酸提取和PCR扩增相信大家都比较熟悉。关于样本采集和预处理您知道多少呢?接下来,就让小编带你们了解一下:

病原核酸检测在临床上常见的样本类型有组织、血液、拭子、痰液等,其中有些样本比较粘稠,直接提取效果欠佳。小编也经常遇到小伙伴询问这些样本的处理方式,在这里小编做了归纳总结,希望对大家有所助益。
组织样本
块状组织样本短时间内无法充分裂解,一般需要进行样本预处理。取新鲜组织样本用生理盐水清洗2次,再将清洗后的组织块用玻璃砂研磨或组织研磨机制成匀浆,加入生理盐水或PBS进行剧烈振荡混匀、离心,取上清进行核酸提取。
血液样本
采用含有抗凝剂的真空采血管保存即可。但采血管中的抗凝剂种类多样,抗凝剂的种类也会直接影响后续检测结果,面对这么多的采血管如何进行选择?小编查阅专业书籍,建议使用EDTA或枸橼酸钠抗凝管,不建议使用肝素抗凝管(因肝素在后面的核酸提取过程中很难去除,且肝素对PCR反应有很强的抑制作用,因此不建议使用肝素抗凝管)。采集完血液,颠倒混匀备用。
血清或血浆样本
全血不加抗凝剂分离的上清是血清,加入抗凝剂分离的上清是血浆。取全血后,静止1-2 h,置于离心机3000 rpm离心15 min即可获得血清或血浆。
拭子样本
拭子样本一般储存在病毒保存管中。病毒保存管根据保存液成分不同又分为灭活型病毒保存管和非灭活型病毒保存管。非灭活型病毒保存液,主要是以运送培养基为基础改良的病毒维持液,可以保留病毒的活性,用于病毒毒株的分离鉴定和病毒培养居多。灭活型病毒保存液是以核酸提取裂解液为基础改良的保存液,可以裂解灭活病毒同时保护病毒核酸不被降解,通常用于病原核酸检测。采样拭子直接接触采样部位,拭子的材质也会对后续检测结果产生影响,其中绒拭子因其良好的吸水性和更有利于释放病毒的特性得到广泛应用。取样后将拭子在保存液中充分振荡混匀,取上清进行核酸提取。
痰液样本
痰液中含有大量黏蛋白和杂质,比较粘稠,直接进行核酸提取效果不佳,因此要进行痰液预处理。用NaOH或变性剂液化,然后离心取沉淀进行核酸提取。
小结
总而言之,样本的收集及适当的预处理,是成功进行核酸提取的前提条件,能够增加病原核酸检测结果的可靠性。今天的样本预处理方式就介绍到这里啦,希望小编上面的介绍能够为您的病原核酸检测实验增添助力。
诺唯赞致力于为病原核酸检测贡献自己的一份力量,下面为您推荐几款病原核酸检测相关产品。

【1】李金明,实时荧光PCR技术【M】.北京:科学出版社,2016年,66-69.
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1楼2021-02-18 14:10回复