还原型谷胱甘肽（reduced glutathione, GSH）含量测定试剂盒（CW1-2, 100T/96S）
说明书酶标法
研究意义：
GSH是细胞内最主要的抗氧化巯基物质，在抗氧化、蛋白质巯基保护和氨基酸跨膜运输等中具有重要作用。还原型与氧化型比值（GSH/GSSG）是细胞氧化还原状态的主要动态指标。因此，测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。
测定原理：
DTNB与GSH反应生成复合物，在412nm处有特征吸收峰；其吸光度与GSH含量成正比。
自备仪器和用品：
酶标仪、酶标板、低温离心机、水浴锅、可调节移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1瓶，4℃保存
试剂二：液体×1瓶，4℃保存
试剂三：液体×1瓶，4℃避光保存
粗酶液提取：
取组织约0.1g，加1.0 mL试剂一，冰上充分研磨，8000rpm 4℃离心10min，取上清，即待测液。
GSH测定操作：
1. 酶标仪预热30min以上，调节波长到412 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中保温30min。
3. 空白孔：取酶标板，加入20μL蒸馏水，140μL试剂二，40μL试剂三，混匀静置2min后测定412 nm吸光度A空白。只需做1~2管。
4. 测定孔：依次加入20μL上清液，140μL试剂二，40μL试剂三，混匀静置2min后测定412 nm吸光度A测定。
GSH含量计算：
GSH标准曲线公式：y=1.5 x（x为GSH浓度，μ mol /mL；y为吸光值）
GSH计算：
GSH（μ mol/g 组织）=(A2－A1) ÷0.0015×V样总÷V样÷W=6.67×(A2－A1) ÷W
V样总：上清液总体积，1 mL；V样：加入反应体系中上清液体积，100μL=0.1 mL；：W：样品质量（g）。
注意事项：因为试剂一中含有蛋白质沉淀剂，因此上清液不能用于蛋白浓度测定。
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