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检测植物组织中的游离氨基酸

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一般的氨基酸包括氨基和羧基,氨基酸中含有氨基的氢和分子中其他部分发生替代而形成亚肽的环状化合物。游离氨基酸,就是没有形成肽的氨基酸。氨基和羧基结合在同一个碳原子上,称为α-氨基酸,天然的游离氨基酸大多数情况下是这样的。在生物体内,游离氨基酸能够促进蛋白质的合成,能量供给,促进肌肉生长,调节酶活。在植物生长代谢的过程中,游离氨基酸含量的变化和植物组织生理特征是有一定的关系的。因此,测定植物中游离氨基酸的含量,对于研究植物的生理特征以及提取应用都有比较大的帮助作用。

常用的检测游离氨基酸的方法是茚三酮法,其测定原理是:在酸性条件下,氨基酸和茚三酮溶液共热,生成氨。氨和茚三酮发生反应生成紫色的化合物“二酮茚胺”。这个化合物在波长为570nm的分光光度计上可以测定吸收值,在一定范围内这个化合物颜色的深浅和氨基酸的含量是成正比的。因此,可以通过这个原理来测定样品中游离氨基酸的含量。

实验过程
1.标准曲线的制作
分别取0.3mol/L的标准氨基酸溶液0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mL到试管中,用蒸馏水补足1mL。再各加入1mL的醋酸缓冲液,接着加入1mL的茚三酮显色液。将以上的试剂充分混匀后,在沸水浴中加热15min,冷却放置5min,加入3mL乙醇溶液稀释,充分摇匀。在分光光度计570mm波长处测定吸光度值,以吸光度值为纵坐标,以氨基酸的浓度为横坐标,制作标准曲线,并求出线性回归方程。可以重复三次,求取平均值。
2.提取
精准的称取1.0g的植物组织,放在研钵里面捣碎,加入5.0mL的乙醇溶液,研磨均匀成浆,转移到100mL的容量瓶中,用蒸馏水稀释,定容到刻度,并过滤掉三角瓶中备用。

3.测定
取样品溶液1.0mL,加入pH5.4,2mol/L的醋酸缓冲液1mL,和茚三酮显色液1mL,混匀后在沸水浴中加热15min,冷却放置5min,加入3mL60%的乙醇溶液稀释,混匀后在570nm的波长处测定吸光度值。根据测定的吸光度值,结合标准曲线,可以计算出样品中所含有的游离氨基酸的含量。


IP属地:上海1楼2024-06-04 14:31回复