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植物细胞色素C氧化酶检测方法

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植物细胞色素C氧化酶,也称为细胞色素氧化酶(COX)。它是细胞内电子传递链末端的酶,具有质子泵的作用,可以将H+由基质提到膜间隙,同时可通过血红素中铁原子的氧化还原变化,将电子传递给分子态氧,最终形成水,并释放出很多的能量。细胞色素C氧化酶是由两个部分组成的,一部分是多肽链,其中包含13个蛋白质。另外一部分是辅助因子,包括细胞色素C、细胞色素c氧化酶辅助蛋白、辅助因子I和辅助因子II。在细胞呼吸链中,细胞色素氧化酶起着重要的作用。

检测细胞色素C氧化酶,这里推荐的是双抗体夹心法。用纯化的植物COX捕获抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被的微孔中依次加入COX,再和HRP标记的检测抗体结合,形成抗体-抗原-酶标记抗体复合物。经过洗涤后加入底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化作用下转化为蓝色,最后加入酸转化为黄色。颜色的深浅和样品中的COX呈正相关,在酶标仪450nm波长下测定吸光度值。通过标准曲线,可以计算出样品中的COX含量。

为了快速的检测,一般用elisa试剂盒的形式。试剂盒组成:说明书,封板摸,密封袋,酶标包被板,标准品,酶标试剂,样品稀释液,显色剂A,显色剂B,终止液,浓缩洗涤液等。

操作步骤:标准品、样品加样-加酶-温浴37℃,60min-配液-洗涤-显色-终止-测定。整个过程要按照说明书的顺序进行,先看看注意事项,避免错误操作或忽略问题而导致偏差。

以标准品的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,绘制标准曲线。根据样品的OD值,可以计算出样品中含有COX的含量。这个含量还不是真实的含量,还要乘以稀释倍数,才能还原为最初的浓度。
来源:上海优选生物。elisa试剂盒,生化试剂盒,应有尽有,供不应求。


IP属地:上海1楼2024-06-18 14:11回复