一、疾病背景
牙周炎是全球第六大常见疾病(占全球人口的11.2%)。最近在27个国家进行的一项流行病学研究结果表明,牙周病在成人(35-44岁)中的患病率约为73%,在老年人(65-74岁)中高达82%,被认为是导致牙齿脱落的最常见原因之一。牙周炎主要是由局部因素引起的牙周支持组织的慢性炎症,最通俗的说法就是牙床发炎了。发病年龄以35岁以后较为多见。最初表现为牙龈炎,牙龈红肿出血,如果牙龈炎未能及时治疗,炎症可由牙龈向深层扩散到牙周膜、牙槽骨而发展为牙周炎。
增加牙周炎风险的因素:
1.牙龈炎。
2.不良的口腔卫生习惯。
3.抽烟或嚼烟。
4.激素变化,例如与怀孕或绝经相关的激素变化。
5.服用消遣性药物,例如吸食大麻或电子烟。
6.肥胖。
7.营养不良,包括维生素 C 水平低。
8.遗传因素。
9.引起口干或牙龈改变的某些药物。
10.引起免疫力降低的疾病,例如白血病、HIV/AIDS 和癌症治疗。
11.某些疾病,例如糖尿病、类风湿关节炎和克罗恩病。
二、牙周炎分类
![](http://tiebapic.baidu.com/forum/w%3D580/sign=d8d74e2a1db5c9ea62f303ebe539b622/fb050ab30f2442a7357f85849743ad4bd1130276.jpg?tbpicau=2024-09-22-05_b8a12d625ed100ce882d993f25b7e45a)
三、牙周炎模型构建
1. 动物选择
![](http://tiebapic.baidu.com/forum/w%3D580/sign=99755221af24b899de3c79305e061d59/09d5850a19d8bc3e00787eebc48ba61ea8d34577.jpg?tbpicau=2024-09-22-05_14d218303d1f3fc7bec385e3893bfee2)
2. 常用牙周炎造模方法
![](http://tiebapic.baidu.com/forum/w%3D580/sign=bbfe86020f540923aa696376a258d1dc/c5b80dfa513d26976fa1707c13fbb2fb4316d871.jpg?tbpicau=2024-09-22-05_82a0bf9e698d4750b25f69101e2c2391)
3. 结扎法
![](http://tiebapic.baidu.com/forum/w%3D580/sign=e8635cceefec8a13141a57e8c7039157/f09ed4c8a786c917c0712a188f3d70cf3bc75771.jpg?tbpicau=2024-09-22-05_d53071df1569ba6724d9f6bd87814f98)
① 实验动物:SD 大鼠。
② 实验材料:显微外科手术器械、正畸结扎丝。
③ 实验过程:
a. 大鼠麻醉后采用直径为0.2 mm的正畸结扎丝结扎大鼠双侧上领第一磨牙。
b. 结扎丝在大鼠上领双侧第一磨牙远中侧进入,环上领第一恒磨牙一周后,用针持在腾侧结扎固定,置于龈下,并保证结扎丝不脱落。
c. 术后待大鼠全部苏醒,即可喂食常规鼠料和水。4周后进行组织学观察,确定建模是否成功
④ 注意事项:
结扎材料有尼龙线、细丝线、橡皮圈、正畸用钢丝等,其中正畸不锈钢丝结扎的效果最好,成功率更高。 l在建模过程中要定期检查结扎材料是否脱落,或根据需要进行更换。 l此方法在结扎时可拨离牙颈处包裹的牙周组织,从而造成轻微的机械性损伤。
⑤ 优点:成本较低、操作简单、疾病开始时间明确、结果可预测,为目前建立牙周炎模型首选的方法
⑥ 缺点:引起的是急性牙周炎病变,与人牙周炎病变过程不同;结扎过程可能造成牙周组织创伤。
4. 接种牙周致病菌法
![](http://tiebapic.baidu.com/forum/w%3D580/sign=b0d8992ec194a4c20a23e7233ef41bac/507ec35c103853439da2ff00d513b07eca808872.jpg?tbpicau=2024-09-22-05_413d1de3b4f63581ef59f2498514a685)
① 实验动物:6周龄SD大鼠。
② 实验材料:牙龈卟啉单胞菌、卡那霉素或安苄素。
③ 实验方法
a. 实验前4天,按20mg/只的剂量经大鼠肌肉注射卡那霉素或安苄素, 1次/d,以便抑制不利于牙龈卟啉菌定居生长的内源性细菌;
b. 给予抗生素3天后,取50g/L的低黏性碳氧甲基纤维素牙龈卟啉菌悬液,经管饲使细菌涂于龈缘乃至整个口腔,每天一次连续三天。
c. 6周至4月左右,可出现牙龈红肿以及牙槽骨吸收,尤其是在磨牙的邻接面位置,表明牙周炎造模成功。
④ 接种菌类
牙周致病菌主要有牙龈卟啉单胞菌、伴放线聚集杆菌、具核梭杆菌、中间普氏菌、福赛坦氏菌、齿垢密螺旋体等。牙龈卟啉单胞菌已被确定为主要的牙周病原体之一,是最常用于牙周炎模型建立的牙周致病菌。
⑤ 优点:造模方法简单,单菌就能诱导牙周炎的发生,多菌引起的感染更严重。
⑥ 缺点:造模周期较长,但单独使用可能比接种细菌联合结扎的方法效果略差。
5. 注射脂多糖法
① 实验动物:6-8周龄SD大鼠。
② 实验材料:LPS(LPS是革兰阴性菌细胞壁外膜中的成分,是革兰阴性菌具有的一种致病物质,具有很高的毒性和抗原性。LPS可以进入牙周组织导致炎症和牙槽骨吸收)。
③ 实验方法:
a. 大鼠麻醉后,在第1和第2磨牙之间颊侧自龈沟注射LPS 0.1mL,2mg/mL,3次/周。
b. 注射3周后,牙槽骨轻微吸收,5周时牙槽骨吸收明显,建立模型速度与人类牙周炎相近,更接近人类牙周炎发病状态。
④ 优点:LPS建立牙周炎模型优点是实验可控性好、节省时间、具有可重复性。
⑤ 缺点:不足之处是LPS纯化过程较复杂,而且LPS生物化学功能不稳定。
6. 高糖黏性食料喂饲法
① 实验动物:稻鼠。
② 实验材料:高糖饲料
③ 实验方法:
a. 从实验当天起喂食糖水和高糖饲料饮食喂养。约22周时高蔗糖饮食组稻鼠牙周袋深度、牙槽骨高度等临床指标均比标准饮食组差。
b. 高糖黏性饮食不利于牙齿的自洁,为鼠类口腔中细菌生长、繁殖提供了较有利环境。
④ 优点:是避免了结扎等造成的鼠牙周组织机械损伤,
⑤ 缺点:只适用于仓鼠、稻鼠这类牙根之间分叉较小,对牙周炎较敏感的鼠类。
四、牙周炎模型评价
1. 牙周炎的模型评价:
![](http://tiebapic.baidu.com/forum/w%3D580/sign=fe1d1c1e9ff9d72a17641015e42a282a/b5420c24ab18972b305678eba0cd7b899e510a73.jpg?tbpicau=2024-09-22-05_c7727b79314fd6de19ccde872554f875)
① 牙龈指数:检测牙龈的炎症程度;
② 沟出血指数:了解牙龈炎症情况;
④ 牙周袋深度;
⑤ 龈沟液渗出水平;
⑥ 组织病理学:必须观察到牙周袋形成以及牙槽骨吸收,以及显著的病理性成骨才能确定牙周炎的形成。前5项检测指标不低于2项,第6项必须具备。
2. 牙周状态炎症评分系统
![](http://tiebapic.baidu.com/forum/w%3D580/sign=1c53011928061d957d4637304bf40a5d/d46136fa828ba61e1d81b00e0734970a304e597c.jpg?tbpicau=2024-09-22-05_4e90981847be366689f0eeb2cdf76e52)
![](http://tiebapic.baidu.com/forum/w%3D580/sign=357df429dd504fc2a25fb00dd5dde7f0/e255a48b87d6277f847c4a196e381f30e924fc7d.jpg?tbpicau=2024-09-22-05_f771ec1eb0e51fbcf62673596e0814bc)
3. 病理分析
①HE染色结果显示,相较对照侧,牙周炎侧牙龈乳头形态破坏,牙周韧带排列紊乱,纤维组织腔隙增多。第一磨牙远中根与第二磨牙近中根之间炎症细胞浸润增多,牙槽骨高度下降,吸收增多。
②通过TRAP染色,发现牙周炎侧牙槽骨中TRAP阳性的破骨细胞数目明显增加。
③CT显示,相比对照侧,牙周炎侧颊侧牙槽骨吸收增多,吸收形成筛网,牙根暴露。
④牙周炎侧炎症相关基因IL-1β、IL -6、TNF-α 表达明显上升。
![](http://tiebapic.baidu.com/forum/w%3D580/sign=b39831c8cb1001e94e3c1407880e7b06/d64fb551f8198618262e97a50ced2e738bd4e67e.jpg?tbpicau=2024-09-22-05_277452350c4fe3b7eb217a2a8f539899)
牙周炎是全球第六大常见疾病(占全球人口的11.2%)。最近在27个国家进行的一项流行病学研究结果表明,牙周病在成人(35-44岁)中的患病率约为73%,在老年人(65-74岁)中高达82%,被认为是导致牙齿脱落的最常见原因之一。牙周炎主要是由局部因素引起的牙周支持组织的慢性炎症,最通俗的说法就是牙床发炎了。发病年龄以35岁以后较为多见。最初表现为牙龈炎,牙龈红肿出血,如果牙龈炎未能及时治疗,炎症可由牙龈向深层扩散到牙周膜、牙槽骨而发展为牙周炎。
增加牙周炎风险的因素:
1.牙龈炎。
2.不良的口腔卫生习惯。
3.抽烟或嚼烟。
4.激素变化,例如与怀孕或绝经相关的激素变化。
5.服用消遣性药物,例如吸食大麻或电子烟。
6.肥胖。
7.营养不良,包括维生素 C 水平低。
8.遗传因素。
9.引起口干或牙龈改变的某些药物。
10.引起免疫力降低的疾病,例如白血病、HIV/AIDS 和癌症治疗。
11.某些疾病,例如糖尿病、类风湿关节炎和克罗恩病。
二、牙周炎分类
![](http://tiebapic.baidu.com/forum/w%3D580/sign=d8d74e2a1db5c9ea62f303ebe539b622/fb050ab30f2442a7357f85849743ad4bd1130276.jpg?tbpicau=2024-09-22-05_b8a12d625ed100ce882d993f25b7e45a)
三、牙周炎模型构建
1. 动物选择
![](http://tiebapic.baidu.com/forum/w%3D580/sign=99755221af24b899de3c79305e061d59/09d5850a19d8bc3e00787eebc48ba61ea8d34577.jpg?tbpicau=2024-09-22-05_14d218303d1f3fc7bec385e3893bfee2)
2. 常用牙周炎造模方法
![](http://tiebapic.baidu.com/forum/w%3D580/sign=bbfe86020f540923aa696376a258d1dc/c5b80dfa513d26976fa1707c13fbb2fb4316d871.jpg?tbpicau=2024-09-22-05_82a0bf9e698d4750b25f69101e2c2391)
3. 结扎法
![](http://tiebapic.baidu.com/forum/w%3D580/sign=e8635cceefec8a13141a57e8c7039157/f09ed4c8a786c917c0712a188f3d70cf3bc75771.jpg?tbpicau=2024-09-22-05_d53071df1569ba6724d9f6bd87814f98)
① 实验动物:SD 大鼠。
② 实验材料:显微外科手术器械、正畸结扎丝。
③ 实验过程:
a. 大鼠麻醉后采用直径为0.2 mm的正畸结扎丝结扎大鼠双侧上领第一磨牙。
b. 结扎丝在大鼠上领双侧第一磨牙远中侧进入,环上领第一恒磨牙一周后,用针持在腾侧结扎固定,置于龈下,并保证结扎丝不脱落。
c. 术后待大鼠全部苏醒,即可喂食常规鼠料和水。4周后进行组织学观察,确定建模是否成功
④ 注意事项:
结扎材料有尼龙线、细丝线、橡皮圈、正畸用钢丝等,其中正畸不锈钢丝结扎的效果最好,成功率更高。 l在建模过程中要定期检查结扎材料是否脱落,或根据需要进行更换。 l此方法在结扎时可拨离牙颈处包裹的牙周组织,从而造成轻微的机械性损伤。
⑤ 优点:成本较低、操作简单、疾病开始时间明确、结果可预测,为目前建立牙周炎模型首选的方法
⑥ 缺点:引起的是急性牙周炎病变,与人牙周炎病变过程不同;结扎过程可能造成牙周组织创伤。
4. 接种牙周致病菌法
![](http://tiebapic.baidu.com/forum/w%3D580/sign=b0d8992ec194a4c20a23e7233ef41bac/507ec35c103853439da2ff00d513b07eca808872.jpg?tbpicau=2024-09-22-05_413d1de3b4f63581ef59f2498514a685)
① 实验动物:6周龄SD大鼠。
② 实验材料:牙龈卟啉单胞菌、卡那霉素或安苄素。
③ 实验方法
a. 实验前4天,按20mg/只的剂量经大鼠肌肉注射卡那霉素或安苄素, 1次/d,以便抑制不利于牙龈卟啉菌定居生长的内源性细菌;
b. 给予抗生素3天后,取50g/L的低黏性碳氧甲基纤维素牙龈卟啉菌悬液,经管饲使细菌涂于龈缘乃至整个口腔,每天一次连续三天。
c. 6周至4月左右,可出现牙龈红肿以及牙槽骨吸收,尤其是在磨牙的邻接面位置,表明牙周炎造模成功。
④ 接种菌类
牙周致病菌主要有牙龈卟啉单胞菌、伴放线聚集杆菌、具核梭杆菌、中间普氏菌、福赛坦氏菌、齿垢密螺旋体等。牙龈卟啉单胞菌已被确定为主要的牙周病原体之一,是最常用于牙周炎模型建立的牙周致病菌。
⑤ 优点:造模方法简单,单菌就能诱导牙周炎的发生,多菌引起的感染更严重。
⑥ 缺点:造模周期较长,但单独使用可能比接种细菌联合结扎的方法效果略差。
5. 注射脂多糖法
① 实验动物:6-8周龄SD大鼠。
② 实验材料:LPS(LPS是革兰阴性菌细胞壁外膜中的成分,是革兰阴性菌具有的一种致病物质,具有很高的毒性和抗原性。LPS可以进入牙周组织导致炎症和牙槽骨吸收)。
③ 实验方法:
a. 大鼠麻醉后,在第1和第2磨牙之间颊侧自龈沟注射LPS 0.1mL,2mg/mL,3次/周。
b. 注射3周后,牙槽骨轻微吸收,5周时牙槽骨吸收明显,建立模型速度与人类牙周炎相近,更接近人类牙周炎发病状态。
④ 优点:LPS建立牙周炎模型优点是实验可控性好、节省时间、具有可重复性。
⑤ 缺点:不足之处是LPS纯化过程较复杂,而且LPS生物化学功能不稳定。
6. 高糖黏性食料喂饲法
① 实验动物:稻鼠。
② 实验材料:高糖饲料
③ 实验方法:
a. 从实验当天起喂食糖水和高糖饲料饮食喂养。约22周时高蔗糖饮食组稻鼠牙周袋深度、牙槽骨高度等临床指标均比标准饮食组差。
b. 高糖黏性饮食不利于牙齿的自洁,为鼠类口腔中细菌生长、繁殖提供了较有利环境。
④ 优点:是避免了结扎等造成的鼠牙周组织机械损伤,
⑤ 缺点:只适用于仓鼠、稻鼠这类牙根之间分叉较小,对牙周炎较敏感的鼠类。
四、牙周炎模型评价
1. 牙周炎的模型评价:
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① 牙龈指数:检测牙龈的炎症程度;
② 沟出血指数:了解牙龈炎症情况;
④ 牙周袋深度;
⑤ 龈沟液渗出水平;
⑥ 组织病理学:必须观察到牙周袋形成以及牙槽骨吸收,以及显著的病理性成骨才能确定牙周炎的形成。前5项检测指标不低于2项,第6项必须具备。
2. 牙周状态炎症评分系统
![](http://tiebapic.baidu.com/forum/w%3D580/sign=1c53011928061d957d4637304bf40a5d/d46136fa828ba61e1d81b00e0734970a304e597c.jpg?tbpicau=2024-09-22-05_4e90981847be366689f0eeb2cdf76e52)
![](http://tiebapic.baidu.com/forum/w%3D580/sign=357df429dd504fc2a25fb00dd5dde7f0/e255a48b87d6277f847c4a196e381f30e924fc7d.jpg?tbpicau=2024-09-22-05_f771ec1eb0e51fbcf62673596e0814bc)
3. 病理分析
①HE染色结果显示,相较对照侧,牙周炎侧牙龈乳头形态破坏,牙周韧带排列紊乱,纤维组织腔隙增多。第一磨牙远中根与第二磨牙近中根之间炎症细胞浸润增多,牙槽骨高度下降,吸收增多。
②通过TRAP染色,发现牙周炎侧牙槽骨中TRAP阳性的破骨细胞数目明显增加。
③CT显示,相比对照侧,牙周炎侧颊侧牙槽骨吸收增多,吸收形成筛网,牙根暴露。
④牙周炎侧炎症相关基因IL-1β、IL -6、TNF-α 表达明显上升。
![](http://tiebapic.baidu.com/forum/w%3D580/sign=b39831c8cb1001e94e3c1407880e7b06/d64fb551f8198618262e97a50ced2e738bd4e67e.jpg?tbpicau=2024-09-22-05_277452350c4fe3b7eb217a2a8f539899)