4、当把一外源DNA插入一克隆载体后,重组DNA分子转化E.coli 细胞所获得的重组子分子可根据其限制酶图谱分为两类,即这两类转化子中所含的重组DNA分子的限制酶图谱不一样,从这两类转化细胞中分离到的重组DNA分子可用限制酶回收插入的片段。而从这两类转化细胞培养液所分离到的DNA却不能用限制酶回收该片段。当把同类转化细胞培养液所分离到的DNA进行复性分析时,DNA分子间不会发生复性,但把从不同类转化细胞培养液分离到的DNA进行同样的实验时,发现在电镜下可观察到十分类似于8字形的结构。如何解释上述实验结果? 可利用图示法解释。(25分+5分)
5、部分基因的调控是由反式作用因子与顺式作用元件相互作用完成,现已通过凝胶延迟等方法得到了一个DNA调控元件,请设计一个克隆与该调控元件发生相互作用的蛋白因子cDNA序列的技术路线。(提示可采用亲和层析和噬菌体展示文库的方法予以克隆,最好以策略图的方式将实验流程画出,再加以文字说明)(50分)
6、假设我们已经分离纯化得到了一个牦牛胃中凝乳酶,经测定得到了其C端8 个氨基酸的序列为:Phe-leu-Gln-Asp-Val-Cys-Tyr-Arg。SDS电泳检测发现该蛋白的分子量约为45,000Da,估计其核苷酸长度在1000bp左右。HPLC分析发现该酶有多个同工酶。请同学们设计一个克隆得到该基因的cDNA和基因组基因的技术路线。(50分)
5、部分基因的调控是由反式作用因子与顺式作用元件相互作用完成,现已通过凝胶延迟等方法得到了一个DNA调控元件,请设计一个克隆与该调控元件发生相互作用的蛋白因子cDNA序列的技术路线。(提示可采用亲和层析和噬菌体展示文库的方法予以克隆,最好以策略图的方式将实验流程画出,再加以文字说明)(50分)
6、假设我们已经分离纯化得到了一个牦牛胃中凝乳酶,经测定得到了其C端8 个氨基酸的序列为:Phe-leu-Gln-Asp-Val-Cys-Tyr-Arg。SDS电泳检测发现该蛋白的分子量约为45,000Da,估计其核苷酸长度在1000bp左右。HPLC分析发现该酶有多个同工酶。请同学们设计一个克隆得到该基因的cDNA和基因组基因的技术路线。(50分)