方法简介
本方法是采用免疫亲和柱净化,液相色谱荧光检测黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2,严格按照2015版药典相关要求,此法适用于各种中药材、饲料、食品等几十种黄曲霉的检测。
1、样品制备
黄曲霉毒素可致癌,应戴手套操作,使用之前所有的试剂和板条的温度回升至室温20-25℃,使用之后立即放回2-8℃保存。
①均质
所有样品必须完全均质,以确保样品具有代表性(样品均质办法可咨询本公司400-1158-566)
②提取
不同的基质提取的方法有所不同,谷物类及复杂基质提取方法也不一样
③净化
净化步骤:将免疫亲和柱固定于固相萃取装置上,用10ml PBS活化免疫亲和小柱,流速保持在2-3ml/min,确保上样前柱子保留少量(约0.5ml)的PBS,不同的基质净化方法略有不同。
2、仪器分析
由于黄曲霉毒素B1和G1本来具有较强的荧光性,但接触水之后,发生荧光的淬灭现象,荧光性基本消失,很难用液相色谱检测出来,采用衍生的方法可使黄曲霉B1和G1的荧光性增强,光化学衍生装置不需要任何化学试剂,直接连接于色谱柱与荧光检测器质检,操作简单,检测结果准确,灵敏度高。
3、实验仪器
APS80-16A高效液相色谱仪
RF-20A荧光检测器
APS-2290光化学衍生器
4、色谱条件
色谱条件1
色谱柱:XB-C18,4.6*150mm,5um
货号:90201-31041(GD)
流动相:洗脱液 A:水
洗脱液 B:甲醇/乙腈 80/20(v/v)等度A/B=40/60
流速:0.8ml/min
柱温:35℃
进样体积:100ul
荧光检测器:激发:365nm 发射:450nm
经色谱柱分离的黄曲霉毒素需经过光化学衍生器衍生
出峰顺序:G2、G1、B2、B1
色谱条件2
色谱柱:XB-C18,2.1*100mm,1.8um
货号:90201-11012(GD)
流动相:甲醇/乙腈/水=18/18/64
流速:0.35ml/min
柱温:35℃
进样体积:20ul
荧光检测器:激发:365nm 发射:450nm
出峰顺序:G2、G1、B2、B1
本方法是采用免疫亲和柱净化,液相色谱荧光检测黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2,严格按照2015版药典相关要求,此法适用于各种中药材、饲料、食品等几十种黄曲霉的检测。
1、样品制备
黄曲霉毒素可致癌,应戴手套操作,使用之前所有的试剂和板条的温度回升至室温20-25℃,使用之后立即放回2-8℃保存。
①均质
所有样品必须完全均质,以确保样品具有代表性(样品均质办法可咨询本公司400-1158-566)
②提取
不同的基质提取的方法有所不同,谷物类及复杂基质提取方法也不一样
③净化
净化步骤:将免疫亲和柱固定于固相萃取装置上,用10ml PBS活化免疫亲和小柱,流速保持在2-3ml/min,确保上样前柱子保留少量(约0.5ml)的PBS,不同的基质净化方法略有不同。
2、仪器分析
由于黄曲霉毒素B1和G1本来具有较强的荧光性,但接触水之后,发生荧光的淬灭现象,荧光性基本消失,很难用液相色谱检测出来,采用衍生的方法可使黄曲霉B1和G1的荧光性增强,光化学衍生装置不需要任何化学试剂,直接连接于色谱柱与荧光检测器质检,操作简单,检测结果准确,灵敏度高。
3、实验仪器
APS80-16A高效液相色谱仪
RF-20A荧光检测器
APS-2290光化学衍生器
4、色谱条件
色谱条件1
色谱柱:XB-C18,4.6*150mm,5um
货号:90201-31041(GD)
流动相:洗脱液 A:水
洗脱液 B:甲醇/乙腈 80/20(v/v)等度A/B=40/60
流速:0.8ml/min
柱温:35℃
进样体积:100ul
荧光检测器:激发:365nm 发射:450nm
经色谱柱分离的黄曲霉毒素需经过光化学衍生器衍生
出峰顺序:G2、G1、B2、B1
色谱条件2
色谱柱:XB-C18,2.1*100mm,1.8um
货号:90201-11012(GD)
流动相:甲醇/乙腈/水=18/18/64
流速:0.35ml/min
柱温:35℃
进样体积:20ul
荧光检测器:激发:365nm 发射:450nm
出峰顺序:G2、G1、B2、B1