01蛋白质提取常见工艺

蛋白质提纯的目的是设法增加制品的纯度或者比活性，对纯化的要求是以合理的效率、速度、收率和纯度，将需要蛋白质从细胞的全部其他成分中，特别是不想要的其他蛋白中分离出来，同时仍保留有这种多肽的生物学活性和化学完整性。

02蛋白质纯化分离的常见步骤
一、原料预处理
为了保证从组织或细胞中稀释出来的蛋白质保持天然状态并且不丧失活性，要采用适当的方法将组织或细胞破碎。动物原料应先剔除结缔组织和脂肪组织，种子材料应先去壳、去种皮以免受单宁等物质的污染，油料种子最好先用低沸点的有机溶剂如乙醚等脱脂。然后根据不同的情况，选择适当的方法，将组织和细胞破碎。
主要方法：
1. 机械破碎法
2. 渗透破碎法
3. 反复冻融法
4. 超声波法
5. 酶法
二、蛋白质抽提
通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提，抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂（十二烷基磺酸钠、triton X-100等），使膜结构破坏，利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中，应注意温度，避免剧烈搅拌等，以防止蛋白质的变性。
三、粗分离
选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。常见方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。常用的有下列几种方法：
方法：
1. 等电点沉淀法
2. 盐析法
3. 有机溶剂沉淀法
四、细分离
用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质一般含有其他蛋白质杂质，须进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。常用的纯化方法有：凝胶过滤层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。

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