各位大佬，帮忙给点意见吧，我的目的基因 1352bp ，Tm 值是 59，我退火温度 60 °C 能够跑出来，另外一个 1900 bp ，退火温度 54°C 能跑出来， 前一个月每次都能跑出来，最近这几天同样的体系，同样的温度同样的引物，除了模板换过，跑出来过几次，但是第二天重新做的时候就跑不出来了，我开始是怀疑模板问题，我稀释过，跑出来一次，现在也跑不出来了，回收纯化过的浓度低，我想着再扩增一次，现在也是扩增后也没有条带了，求求各位大佬给点意见，这是怎么回事。