3.7.2 病害种类确定
根据苜蓿病状大概确定田间发生的病害种类，紧接着观察苜蓿发病部位的病征， 如是否有霉层等，根据经验初步诊断病害，随后每种病害分别采取 20 株以上的典 型发病苜蓿，使用标本夹制作标本，做好记录，带回实验室（张岳阳, 2021）。
将标本夹带回实验室后，选取具有典型症状的标本在体视显微镜下进行观察， 观察发病部位病斑的大小、霉层以及颗粒物等。 在观察到颗粒状物后，在体视镜下 用挑针挑取或者用胶带粘取一小部分颗粒物，将其缓慢放入在滴有少量无菌水的载 破片上，随后轻轻盖上盖玻片，当有多余水分流出时，用吸水纸进行吸取，水装片 制作完成后，将其放在光学显微镜低倍镜下进行观察，随之转换之高倍镜进行观察， 待观察到孢子等时，用照相机进行拍照，对照工具书找到符合的菌物属种，对制作 水装片困难的病害进行常规组织分离培养（李彦忠和南志标, 2015; 张岳阳, 2021）。
将发病组织在手龙头下用自来水进行冲洗，冲洗干净后，用无菌镊子夹取发病 组织放入 75%酒精中消毒 30S 后，再用无菌镊子夹取发病组织放入装入 1%次氯酸 钠溶液的培养皿中进行消毒，消毒 1min 后，使用无菌水进行冲洗，共计冲洗 3 次， 再用灭菌后的手术刀将发病组织切成小块，用无菌镊子夹取病组织放在 PDA 培养 基上培养，随后每天观察菌落形态及产孢结构并拍照记录，随后根据形态查阅工具 书确定病原（李彦忠, 2007）。
根据苜蓿病状大概确定田间发生的病害种类，紧接着观察苜蓿发病部位的病征， 如是否有霉层等，根据经验初步诊断病害，随后每种病害分别采取 20 株以上的典 型发病苜蓿，使用标本夹制作标本，做好记录，带回实验室（张岳阳, 2021）。
将标本夹带回实验室后，选取具有典型症状的标本在体视显微镜下进行观察， 观察发病部位病斑的大小、霉层以及颗粒物等。 在观察到颗粒状物后，在体视镜下 用挑针挑取或者用胶带粘取一小部分颗粒物，将其缓慢放入在滴有少量无菌水的载 破片上，随后轻轻盖上盖玻片，当有多余水分流出时，用吸水纸进行吸取，水装片 制作完成后，将其放在光学显微镜低倍镜下进行观察，随之转换之高倍镜进行观察， 待观察到孢子等时，用照相机进行拍照，对照工具书找到符合的菌物属种，对制作 水装片困难的病害进行常规组织分离培养（李彦忠和南志标, 2015; 张岳阳, 2021）。
将发病组织在手龙头下用自来水进行冲洗，冲洗干净后，用无菌镊子夹取发病 组织放入 75%酒精中消毒 30S 后，再用无菌镊子夹取发病组织放入装入 1%次氯酸 钠溶液的培养皿中进行消毒，消毒 1min 后，使用无菌水进行冲洗，共计冲洗 3 次， 再用灭菌后的手术刀将发病组织切成小块，用无菌镊子夹取病组织放在 PDA 培养 基上培养，随后每天观察菌落形态及产孢结构并拍照记录，随后根据形态查阅工具 书确定病原（李彦忠, 2007）。
