大家好，今天跟大家分享一篇题为题为FTO deficiency in older livers ferroptosis during isch aemia/re perfusion injury by upreg ulating ACSL4 and TFRC（通过上调ACSL4和TFRC在缺血/再灌注损伤期间对老年肝脏铁下垂的FTO无效）由于老年肝脏更容易发生脂质紊乱和线粒体衰竭，并且随着年龄的增长，铁离子在肝脏中进一步积累，老年肝脏更容易发生肝缺血/再灌注损伤（HIRI）。
01
研究背景
老年肝脏更容易发生肝缺血/再灌注损伤 （HIRI），这严重限制了它们在肝移植中的应用。潜在的机制尚不清楚。在这里，我们证明老年肝脏在 HIRI 期间表现出铁死亡增加。抑制铁死亡可显著减弱旧的 HIRI 表型。质谱分析显示，脂肪量和肥胖相关基因 （FTO） 表达在老年肝脏中下调，尤其是在 HIRI 期间。
过表达 FTO 通过抑制铁死亡来改善老年的 HIRI 表型。从机制上讲，酰基辅酶 A 合成酶长链家族 4 （ACSL4） 和转铁蛋白受体蛋白 1 （TFRC） 是铁死亡的两个关键阳性贡献者，是 FTO 靶标。为了改善效果，FTO 需要以 m6A 依赖性方式抑制 Acsl4 和 Tfrc mRNA 稳定性。
此外，我们证明烟酰胺单核苷酸可以上调 FTO 去甲基化酶活性，抑制铁死亡并减少旧的 HIRI。总的来说，这些发现揭示了有助于老年 HIRI 发病机制的 FTO-ACSL4/TFRC 调节途径，为与 FTO 去甲基化酶活性相关的策略的临床转化提供了见解，以改善老年供体肝移植后移植物功能。
见图一
老年肝脏易患 IRI，其特征是铁死亡增加。
图一
a POD1 时 OLT 受者的血清 AST 和 ALT 水平（年轻组，n = 10;老年组，n = 10）。AST 和 ALT，双尾 t 检验。
b OLT 受者血清 ALT 和 AST 水平从 POD1 到 POD7 下降的曲线 （年轻组，n = 10;老年组，n = 10）。
c OLT 活检中 HE 染色、TUNEL 染色和 DHE 染色的代表性图像（放大倍数，× 200）。
d TUNEL 染色和 DHE 染色的相对定量，双尾 t 检验。
e OLT 活检中 C11 BODIPY 染色的代表性图像和相对定量（放大倍数，× 200），双尾 t 检验。C-E三个独立的生物人体样本。
f Western blotting 显示灌注前后 OLT 活检中铁死亡相关蛋白的表达。
g 患有 HIRI 的小鼠的血清 ALT 和 AST 水平（n = 3，每组）。AST 和 ALT，双尾 t 检验。
H-K肝组织中HE染色（放大倍数，×100）、TUNEL染色（放大倍数，×200）、DHE染色（放大倍数，×100）和C11 BODIPY染色（放大倍数，×200）的代表性图像和相对定量，双尾t检验（年轻小鼠，n = 3;老年小鼠，n = 3）。
l 代表性的 TEM 图像。红色箭头表示线粒体嵴的减少或消失，这表明铁死亡。
m Western blotting 显示肝组织中铁死亡相关蛋白的表达。
L、M三个独立的生物小鼠样本。P < 0.05 被认为具有统计学意义。统计数据以 SD ±平均值表示，源数据以源数据文件的形式提供。
见图二
抑制铁死亡可减轻旧的 HIRI。
图二
a 不同处理后老年小鼠的血清 ALT 和 AST 水平（n = 3，每组）。AST 和 ALT，单因素方差分析，后跟多重比较。
b、cHE 染色（放大倍数，× 100）、TUNEL 染色（放大倍数，× 200）、DHE 染色（放大倍数，× 100）和 C11 BODIPY 染色（放大倍数，× 200）的代表性图像和相对定量，单向方差分析，然后进行多重比较。
D-G原代肝细胞和衰老 THLE2 细胞中钙黄绿素-AM/PI 双染色、DHE 染色和 C11 BODIPY 染色的代表性图像和相对定量 （钙黄绿素-AM/PI，放大倍数，× 100;DHE，放大倍率，× 100;C11 BODIPI，放大倍率，× 200;单向方差分析后跟多重比较）。统计数据以 mean±SD 表示，误差线表示三个独立实验的平均值。P < 0.05 被认为具有统计学意义，源数据作为源数据文件提供。
见图三
FTO 在老年肝脏中低水平表达，在 HIRI 中进一步降低。
图三
a 从年轻和老年小鼠 （n = 3，前组） 的 HIRI 模型获得的肝脏样品上 LC-MS 的示意图。
b PCA 显示组内重复性和组间变异性。S0， 旧假组;S12， old-IRI 组;Y0， young-sham 组;Y12， young-IRI 组。
c 热图显示不同组中差异表达的蛋白质。
d 4 个对照组中上调/下调蛋白质的相对定量。
e 维恩图显示了 4 个对照组中差异表达蛋白的数量和分布。选择 NAT8 、 FTO 和 ABLIM1 进行进一步研究。Western blotting 显示 FTO 在肝组织 （f 人，上图;小鼠，下） 和细胞 （g 原代肝细胞，左;THLE2 细胞，右）在 IR 期间具有不同年龄。n = 3 个独立的生物小鼠样品或 3 个独立的细胞实验。IR 期间年轻和老年肝组织中 FTO 的 IHC 染色的代表性图像和相对定量 （h 人;I 小鼠，双尾 t 检验。放大倍数，× 200）。通过斑点印迹测定法测定不同组 mRNA 中 m6A 的丰度（j 人样品，每组 n = 8;k 小鼠样本。n = 每组 3 个）。MB（亚甲蓝）代表 RNA 样品的上样对照。相对 m6A 定量结果用条形图、单因素方差分析后跟多重比较显示。统计数据以 mean±SD 表示，误差线表示三个独立实验的平均值。P < 0.05 被认为具有统计学意义。
见图四
FTO 通过减少铁死亡来减轻旧的 HIRI。
图四
a POD1 时 OLT 受者的血清 AST 和 ALT 水平（FTO-Low 组，n = 5;FTO-High 组，n = 5）。所有捐献者均超过 50 岁。根据肝组织 FTO 的 IHC 评分对受者进行分组。AST 和 ALT，双尾 t 检验。b POD1 到 POD7 不同 FTO 表达水平的 OLT 受者血清 AST 和 AST 水平的变化。AST 和 ALT，双尾 t 检验。c、d 不同组老年小鼠的血清 ALT 和 AST 水平 （n = 3，每组）。ALT 和 AST，单因素方差分析，后跟多重比较。e HE 染色（放大倍数，× 100）、TUNEL 染色（放大倍数，× 200）、DHE 染色（放大倍数，× 100）和 C11 BODIPY 染色（放大× 200）的代表性图像和相对定量/Suzuki 评分在不同处理下，单向方差分析后进行多重比较。f 代表性 TEM 图像。红色箭头表示线粒体嵴的减少或消失，以反映铁死亡。g Western blotting 显示与铁死亡相关的关键因子的表达发生变化。f、g三个独立的生物小鼠样本。h 钙黄绿素-AM/PI 双染色（放大倍数，× 100）、DHE 染色（放大倍数，× 200）和 C11 BODIPY 染色（放大倍数，× 200）的代表性图像和相对定量，以评估 FB23-2 在 H/R 期间对原代肝细胞的影响，单向方差分析，然后进行多重比较。i erastin 对 H/R 期间原代肝细胞细胞死亡（放大倍数，× 100）、ROS 积累（放大倍数，× 200）和脂质过氧化（放大倍数，× 200）的影响，单因素方差分析后进行多重比较。统计数据以 mean±SD 表示，误差线表示三个独立实验的平均值。P < 0.05 被认为具有统计学意义。
见图五
FTO 通过减少 m6A 修饰来抑制 ACSL4 和 TFRC 的表达。
图五
a 一个饼图，显示根据 m6A RNA 测序，对照组和 FTO 组之间差异峰的分布和相对比例。
b 饼图显示上调/下调差分峰的百分比。
c 代表性 FTO 电位结合基序。
d 气泡图显示 m6A 峰下调的富集信号通路。二项分布检验 （双侧），P < 0.05 被认为具有统计学意义。
e 整合基因组浏览器视图显示对照组和 FTO 组中 Acsl4 和 Tfrc 的 m6A 修饰。
f MeRIP-qPCR 在转染对照和 FTO 的衰老 THLE2 细胞中，通过特异性 m6A 抗体免疫沉淀对 Acsl4 和 Tfrc m6A 水平的倍数富集进行定量分析（双尾 t 检验）。
g 集成的基因组浏览器视图通过 FTO-CLIP-seq 显示 Acsl4 和 Tfrc 中 FTO 的结合峰。
h 原代肝细胞中 FTO 过表达或沉默后靶基因表达的 RT\qPCR 验证（双尾 t 检验）。
i FTO 通过 western blotting 对原代肝细胞中 ACSL4 和 TFRC 表达的影响，三个独立的细胞实验。
j 临床肝脏标本中 FTO、ACSL4 和 TFRC 的 IHC 染色（放大倍数，× 200）的代表性图像，每组三个独立的临床人体样本。
K、L通过 RT\u2012qPCR 分析 FTO 对衰老 THLE2 细胞中 Acsl4 和 Tfrc mRNA 半衰期的影响。m FTO 对 YTHDC2 通过 western blotting 对 ACSL4 的调节的影响。n FTO 对 YTHDF2 通过蛋白质印迹对 TFRC 的调节的影响。
m、n三个独立的细胞实验。o FTO 对 YTHDC2 通过 RIP 测定富集 Acsl4 mRNA 的影响，单向方差分析后进行多重比较。p FTO 对 YTHDF2 通过 RIP 测定富集 Tfrc mRNA 的影响，单因素方差分析后进行多重比较。统计数据以 mean±SD 表示，误差线表示三个独立实验的平均值。P < 0.05 被认为具有统计学意义，源数据作为源数据文件提供。
见图六
FTO 介导的旧 HIRI 缓解依赖于 ACSL4 和 TFRC。
图六
a 不同处理的老年小鼠的血清 ALT 和 AST 水平 （n = 3，每组）。AST 和 ALT，单因素方差分析，后跟多重比较。
b 不同组中老年肝组织中 HE 染色（放大倍数，× 100）和相对 Suzuki 评分的代表性图像，单向方差分析后进行多重比较。
c 代表性 TEM 图像。红色箭头表示线粒体嵴的减少或消失，这表明铁死亡。比例尺，1 μm。
d Western blotting 显示不同处理下老年肝组织中与铁死亡相关的关键蛋白的表达。c、d三个独立的生物小鼠样本。
e-n不同处理后原代肝细胞 H/R 期间钙黄绿素-AM/PI 双染色（放大倍数，× 100）、DHE 染色（放大倍数，× 100）和 C11 BODIPY 染色（放大倍数，× 200）的代表性图像和相对定量，单因素方差分析，然后进行多重比较。统计数据以 mean±SD 表示，误差线表示三个独立实验的平均值。P < 0.05 被认为具有统计学意义。
02
研究结论
总之，我们提供了足够的数据来证明，通过 NMN 增强 FTO 去甲基化酶活性可以通过降低 ACSL4 和 TFRC 的表达来缓解旧的 HIRI，这两者都是导致铁死亡的关键分子。需要进行进一步的临床试验来评估 NMN 对改善 OLT 期间接受老年肝脏的患者肝功能的影响。
好了，今天的文献解读就到这儿来，我们下期再见！如果你正在开展临床研究.需要方案设计.数据管理. 数据分析等支持.也随时可以联系我们。
01
研究背景
老年肝脏更容易发生肝缺血/再灌注损伤 （HIRI），这严重限制了它们在肝移植中的应用。潜在的机制尚不清楚。在这里，我们证明老年肝脏在 HIRI 期间表现出铁死亡增加。抑制铁死亡可显著减弱旧的 HIRI 表型。质谱分析显示，脂肪量和肥胖相关基因 （FTO） 表达在老年肝脏中下调，尤其是在 HIRI 期间。
过表达 FTO 通过抑制铁死亡来改善老年的 HIRI 表型。从机制上讲，酰基辅酶 A 合成酶长链家族 4 （ACSL4） 和转铁蛋白受体蛋白 1 （TFRC） 是铁死亡的两个关键阳性贡献者，是 FTO 靶标。为了改善效果，FTO 需要以 m6A 依赖性方式抑制 Acsl4 和 Tfrc mRNA 稳定性。
此外，我们证明烟酰胺单核苷酸可以上调 FTO 去甲基化酶活性，抑制铁死亡并减少旧的 HIRI。总的来说，这些发现揭示了有助于老年 HIRI 发病机制的 FTO-ACSL4/TFRC 调节途径，为与 FTO 去甲基化酶活性相关的策略的临床转化提供了见解，以改善老年供体肝移植后移植物功能。
见图一
老年肝脏易患 IRI，其特征是铁死亡增加。
图一
a POD1 时 OLT 受者的血清 AST 和 ALT 水平（年轻组，n = 10;老年组，n = 10）。AST 和 ALT，双尾 t 检验。
b OLT 受者血清 ALT 和 AST 水平从 POD1 到 POD7 下降的曲线 （年轻组，n = 10;老年组，n = 10）。
c OLT 活检中 HE 染色、TUNEL 染色和 DHE 染色的代表性图像（放大倍数，× 200）。
d TUNEL 染色和 DHE 染色的相对定量，双尾 t 检验。
e OLT 活检中 C11 BODIPY 染色的代表性图像和相对定量（放大倍数，× 200），双尾 t 检验。C-E三个独立的生物人体样本。
f Western blotting 显示灌注前后 OLT 活检中铁死亡相关蛋白的表达。
g 患有 HIRI 的小鼠的血清 ALT 和 AST 水平（n = 3，每组）。AST 和 ALT，双尾 t 检验。
H-K肝组织中HE染色（放大倍数，×100）、TUNEL染色（放大倍数，×200）、DHE染色（放大倍数，×100）和C11 BODIPY染色（放大倍数，×200）的代表性图像和相对定量，双尾t检验（年轻小鼠，n = 3;老年小鼠，n = 3）。
l 代表性的 TEM 图像。红色箭头表示线粒体嵴的减少或消失，这表明铁死亡。
m Western blotting 显示肝组织中铁死亡相关蛋白的表达。
L、M三个独立的生物小鼠样本。P < 0.05 被认为具有统计学意义。统计数据以 SD ±平均值表示，源数据以源数据文件的形式提供。
见图二
抑制铁死亡可减轻旧的 HIRI。
图二
a 不同处理后老年小鼠的血清 ALT 和 AST 水平（n = 3，每组）。AST 和 ALT，单因素方差分析，后跟多重比较。
b、cHE 染色（放大倍数，× 100）、TUNEL 染色（放大倍数，× 200）、DHE 染色（放大倍数，× 100）和 C11 BODIPY 染色（放大倍数，× 200）的代表性图像和相对定量，单向方差分析，然后进行多重比较。
D-G原代肝细胞和衰老 THLE2 细胞中钙黄绿素-AM/PI 双染色、DHE 染色和 C11 BODIPY 染色的代表性图像和相对定量 （钙黄绿素-AM/PI，放大倍数，× 100;DHE，放大倍率，× 100;C11 BODIPI，放大倍率，× 200;单向方差分析后跟多重比较）。统计数据以 mean±SD 表示，误差线表示三个独立实验的平均值。P < 0.05 被认为具有统计学意义，源数据作为源数据文件提供。
见图三
FTO 在老年肝脏中低水平表达，在 HIRI 中进一步降低。
图三
a 从年轻和老年小鼠 （n = 3，前组） 的 HIRI 模型获得的肝脏样品上 LC-MS 的示意图。
b PCA 显示组内重复性和组间变异性。S0， 旧假组;S12， old-IRI 组;Y0， young-sham 组;Y12， young-IRI 组。
c 热图显示不同组中差异表达的蛋白质。
d 4 个对照组中上调/下调蛋白质的相对定量。
e 维恩图显示了 4 个对照组中差异表达蛋白的数量和分布。选择 NAT8 、 FTO 和 ABLIM1 进行进一步研究。Western blotting 显示 FTO 在肝组织 （f 人，上图;小鼠，下） 和细胞 （g 原代肝细胞，左;THLE2 细胞，右）在 IR 期间具有不同年龄。n = 3 个独立的生物小鼠样品或 3 个独立的细胞实验。IR 期间年轻和老年肝组织中 FTO 的 IHC 染色的代表性图像和相对定量 （h 人;I 小鼠，双尾 t 检验。放大倍数，× 200）。通过斑点印迹测定法测定不同组 mRNA 中 m6A 的丰度（j 人样品，每组 n = 8;k 小鼠样本。n = 每组 3 个）。MB（亚甲蓝）代表 RNA 样品的上样对照。相对 m6A 定量结果用条形图、单因素方差分析后跟多重比较显示。统计数据以 mean±SD 表示，误差线表示三个独立实验的平均值。P < 0.05 被认为具有统计学意义。
见图四
FTO 通过减少铁死亡来减轻旧的 HIRI。
图四
a POD1 时 OLT 受者的血清 AST 和 ALT 水平（FTO-Low 组，n = 5;FTO-High 组，n = 5）。所有捐献者均超过 50 岁。根据肝组织 FTO 的 IHC 评分对受者进行分组。AST 和 ALT，双尾 t 检验。b POD1 到 POD7 不同 FTO 表达水平的 OLT 受者血清 AST 和 AST 水平的变化。AST 和 ALT，双尾 t 检验。c、d 不同组老年小鼠的血清 ALT 和 AST 水平 （n = 3，每组）。ALT 和 AST，单因素方差分析，后跟多重比较。e HE 染色（放大倍数，× 100）、TUNEL 染色（放大倍数，× 200）、DHE 染色（放大倍数，× 100）和 C11 BODIPY 染色（放大× 200）的代表性图像和相对定量/Suzuki 评分在不同处理下，单向方差分析后进行多重比较。f 代表性 TEM 图像。红色箭头表示线粒体嵴的减少或消失，以反映铁死亡。g Western blotting 显示与铁死亡相关的关键因子的表达发生变化。f、g三个独立的生物小鼠样本。h 钙黄绿素-AM/PI 双染色（放大倍数，× 100）、DHE 染色（放大倍数，× 200）和 C11 BODIPY 染色（放大倍数，× 200）的代表性图像和相对定量，以评估 FB23-2 在 H/R 期间对原代肝细胞的影响，单向方差分析，然后进行多重比较。i erastin 对 H/R 期间原代肝细胞细胞死亡（放大倍数，× 100）、ROS 积累（放大倍数，× 200）和脂质过氧化（放大倍数，× 200）的影响，单因素方差分析后进行多重比较。统计数据以 mean±SD 表示，误差线表示三个独立实验的平均值。P < 0.05 被认为具有统计学意义。
见图五
FTO 通过减少 m6A 修饰来抑制 ACSL4 和 TFRC 的表达。
图五
a 一个饼图，显示根据 m6A RNA 测序，对照组和 FTO 组之间差异峰的分布和相对比例。
b 饼图显示上调/下调差分峰的百分比。
c 代表性 FTO 电位结合基序。
d 气泡图显示 m6A 峰下调的富集信号通路。二项分布检验 （双侧），P < 0.05 被认为具有统计学意义。
e 整合基因组浏览器视图显示对照组和 FTO 组中 Acsl4 和 Tfrc 的 m6A 修饰。
f MeRIP-qPCR 在转染对照和 FTO 的衰老 THLE2 细胞中，通过特异性 m6A 抗体免疫沉淀对 Acsl4 和 Tfrc m6A 水平的倍数富集进行定量分析（双尾 t 检验）。
g 集成的基因组浏览器视图通过 FTO-CLIP-seq 显示 Acsl4 和 Tfrc 中 FTO 的结合峰。
h 原代肝细胞中 FTO 过表达或沉默后靶基因表达的 RT\qPCR 验证（双尾 t 检验）。
i FTO 通过 western blotting 对原代肝细胞中 ACSL4 和 TFRC 表达的影响，三个独立的细胞实验。
j 临床肝脏标本中 FTO、ACSL4 和 TFRC 的 IHC 染色（放大倍数，× 200）的代表性图像，每组三个独立的临床人体样本。
K、L通过 RT\u2012qPCR 分析 FTO 对衰老 THLE2 细胞中 Acsl4 和 Tfrc mRNA 半衰期的影响。m FTO 对 YTHDC2 通过 western blotting 对 ACSL4 的调节的影响。n FTO 对 YTHDF2 通过蛋白质印迹对 TFRC 的调节的影响。
m、n三个独立的细胞实验。o FTO 对 YTHDC2 通过 RIP 测定富集 Acsl4 mRNA 的影响，单向方差分析后进行多重比较。p FTO 对 YTHDF2 通过 RIP 测定富集 Tfrc mRNA 的影响，单因素方差分析后进行多重比较。统计数据以 mean±SD 表示，误差线表示三个独立实验的平均值。P < 0.05 被认为具有统计学意义，源数据作为源数据文件提供。
见图六
FTO 介导的旧 HIRI 缓解依赖于 ACSL4 和 TFRC。
图六
a 不同处理的老年小鼠的血清 ALT 和 AST 水平 （n = 3，每组）。AST 和 ALT，单因素方差分析，后跟多重比较。
b 不同组中老年肝组织中 HE 染色（放大倍数，× 100）和相对 Suzuki 评分的代表性图像，单向方差分析后进行多重比较。
c 代表性 TEM 图像。红色箭头表示线粒体嵴的减少或消失，这表明铁死亡。比例尺，1 μm。
d Western blotting 显示不同处理下老年肝组织中与铁死亡相关的关键蛋白的表达。c、d三个独立的生物小鼠样本。
e-n不同处理后原代肝细胞 H/R 期间钙黄绿素-AM/PI 双染色（放大倍数，× 100）、DHE 染色（放大倍数，× 100）和 C11 BODIPY 染色（放大倍数，× 200）的代表性图像和相对定量，单因素方差分析，然后进行多重比较。统计数据以 mean±SD 表示，误差线表示三个独立实验的平均值。P < 0.05 被认为具有统计学意义。
02
研究结论
总之，我们提供了足够的数据来证明，通过 NMN 增强 FTO 去甲基化酶活性可以通过降低 ACSL4 和 TFRC 的表达来缓解旧的 HIRI，这两者都是导致铁死亡的关键分子。需要进行进一步的临床试验来评估 NMN 对改善 OLT 期间接受老年肝脏的患者肝功能的影响。
好了，今天的文献解读就到这儿来，我们下期再见！如果你正在开展临床研究.需要方案设计.数据管理. 数据分析等支持.也随时可以联系我们。
